page_banner

Giá trị Ct định lượng huỳnh quang phát hiện axit nucleic - một thông số yêu - ghét

Giá trị Ct định lượng huỳnh quang phát hiện axit nucleic - một thông số yêu - ghét

“Chương trình chẩn đoán và điều trị bệnh viêm phổi do vi rút mạch vành mới (Phiên bản thử nghiệm lần thứ chín)” sử dụng giá trị Ct phát hiện axit nucleic ≥35 như một trong những cơ sở quan trọng để đưa ra quản lý cách ly hoặc xuất viện.Vì vậy, giá trị Ct của bộ phát hiện axit nucleic đại diện cho điều gì?Giá trị Ct của các bộ dụng cụ khác nhau có thể so sánh được không?Giá trị Ct càng thấp thì hiệu suất của kit càng tốt?
Giá trị Ct (Threshold Cycle, Ct) là số chu kỳ PCR khi cường độ của tín hiệu huỳnh quang định lượng huỳnh quang thời gian thực vượt quá ngưỡng đặt.Bộ dụng cụ phát hiện axit nucleic lấy vương miện mới làm ví dụ.Đối với cùng một phản ứng của cùng một bộ kit để phát hiện hai mẫu chứa vi rút, A và B, ở một mức độ nhất định, kích thước của giá trị Ct đại diện cho số lượng bản sao của gen vi rút, tức là tải lượng vi rút.Ct của mẫu B càng thấp thì tải lượng vi rút càng cao.Giá trị Ct tỷ lệ nghịch với tải lượng vi rút và khả năng lây nhiễm của nó.Ưu và nhược điểm của các bộ định lượng huỳnh quang thời gian thực khác nhau không thể được đánh giá chỉ bằng kích thước của giá trị Ct, bởi vì các giá trị Ct của các bộ dụng cụ khác nhau không thể so sánh được.Đánh giá hoạt động của bộ dụng cụ cần được đo lường từ các khía cạnh của độ nhạy (giới hạn phát hiện tối thiểu), độ đặc hiệu, độ chính xác, độ ổn định và ứng dụng chẩn đoán.Mỗi nhà sản xuất thuốc thử có mười tám loại võ thuật riêng và chúng có sức mạnh ma thuật riêng để ứng dụng, vì vậy tôi sẽ không đi sâu vào chi tiết ở đây.
Đối với các thiết bị / hệ thống phân tích PCR định lượng theo thời gian thực (QPCR) thông thường, việc thu thập các giá trị Ct và việc sử dụng chúng rộng rãi trong các ứng dụng phát hiện mầm bệnh đã quen thuộc với mọi người.Với sự phát triển của ngành công nghiệp và sự tiến bộ của công nghệ, thiết bị và thuốc thử QPCR đã gặp phải những cơ hội và thách thức.Yiou Think Tank (Báo cáo Nghiên cứu năm 2021 về Ngành Kiểm tra Di truyền của Trung Quốc: Công nghệ) đã phân tích rằng hầu hết các công ty trong ngành QPCR của nước tôi đang phải đối mặt với những vấn đề chung dựa trên công nghệ.Để đối phó với những vấn đề này, các giải pháp chủ yếu được chia thành hai loại: tăng tốc cải tiến công nghệ và triển khai công nghệ mới.
POCT cho chẩn đoán phân tử QPCR là một trong những hướng phát triển của ngành, và việc cải thiện hiệu suất là một yếu tố quan trọng để đẩy nhanh việc ứng dụng công nghệ.Đối với thiết bị POCT có thông lượng QPCR một mẫu, làm thế nào để tối ưu hóa giá trị Ct của thông số chính của một phản ứng trong R&D?Cùng một thiết bị, cùng một hệ thống phản ứng và cùng một nồng độ khuôn mẫu, về mặt lý thuyết, giá trị Ct của một phản ứng càng lớn thì hiệu suất của enzym trong phản ứng càng thấp.
Trong quá trình nâng cao hiệu quả của phản ứng enzym và tối ưu hóa giá trị Ct, trước tiên có thể phân tích đường cong khuếch đại định lượng huỳnh quang chu kỳ 40 PCR điển hình.Đường cong khuếch đại trong hình bên dưới được chia thành pha nền huỳnh quang, pha khuếch đại hàm mũ, pha tuyến tính và pha bình nguyên.Để đạt được nền huỳnh quang thấp hơn, càng nhiều càng tốt để phân biệt với giá trị huỳnh quang của quá trình khuếch đại hàm mũ sớm, cần phải kiểm tra từ chất mang vật tư phản ứng, sàng lọc thiết kế đầu dò mồi và hệ thống đệm phản ứng.Giai đoạn khuếch đại hàm mũ là phản ứng trực tiếp nhất đối với hoạt động của enzyme, và nó cũng là bằng chứng về sự phối hợp hoàn hảo của thiết bị POCT, chất mang phản ứng và thuốc thử.Tại thời điểm này, việc kiểm soát nhiệt độ thiết bị, thu nhận và phân tích tín hiệu quang học, tính tương thích sinh học của chất mang, và hiệu suất hệ thống của thuốc thử cần được điều chỉnh và kiểm tra ở mọi khía cạnh.Cuối cùng, toàn bộ quá trình khuếch đại được hoàn thành và kết quả phải được trình bày bằng một thuật toán dữ liệu nghiêm ngặt để có được giá trị Ct hợp lý.
Dòng CT
Một bước nhỏ trong việc tối ưu hóa giá trị Ct là vô số bước của nhân viên R&D.Trong nỗi lo lắng, háo hức của ngày đêm, mỗi khi “núi sông chẳng thấy đâu, liễu tối, hoa sáng thì có làng khác”, lại cho ta thêm dũng khí và niềm đam mê tiến về phía trước. lại.


Thời gian đăng: 29-9-2022